—、抗精子免疫不育的檢查

抗精子免疫包括抗精子體液免疫(抗精子抗體)和抗精子細(xì)胞免疫。

(二)抗精子抗體的檢測

1，性交后試驗(yàn)于性交后6~24h內(nèi)取宮頸粘液，在高倍鏡下觀察計數(shù)精子數(shù)。每高倍視野中，有≥21條極度活潑的精子者特異性因素干擾。若血清效價≥1：32，則可認(rèn)為確含精子抗體。其他尚有毛細(xì)管凝集法及平板凝集法，較少用。

2.補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動試驗(yàn)精子抗體與精子抗原結(jié)合，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性及完整性的損害，若為制動抗體，使精干失去活動力，制動值≥2為陽性;若為細(xì)胞毒抗體，則用某些染料染色陽性，要求精子活率>70%。微量法僅需樣本幾微升，對精子活動率較低的樣本，可用上游法提取活精子，活率可達(dá)90%以上。奉法僅能檢測作用于精子尾干的抗體。特異性強(qiáng)，敏感性差，假陰性率較高。

3，被動血凝法用精子提取物及精漿包被經(jīng)處理的紅細(xì)胞使之致敏，將致敏紅細(xì)胞與待測稀釋血清在微量反應(yīng)板上進(jìn)行反應(yīng)，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集為陽性。此法不受精子活率、計數(shù)、精掖中微生物或組織碎片的影響，研究者認(rèn)為此法特異、敏感，但報道較少，其可靠性及實(shí)用性尚待證實(shí)。

4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及生物素—親合素酶聯(lián)免疫吸附法(BA—ELISA)應(yīng)用完整精干或精子膜抗原包被固相載體，待測樣本中精子抗體與之培養(yǎng)后可結(jié)合于抗原表面。隨之酶標(biāo)第二抗體亦可結(jié)合其表面，后經(jīng)加酶底物，根據(jù)底物顯色情況判斷結(jié)果。可用肉眼觀察，亦可用酶標(biāo)儀測定，后者客觀準(zhǔn)確，一般以大于一組陰性血清光密度均值加2倍標(biāo)準(zhǔn)差為陽性。由于完整精子包被易致非特異性吸附.因此若以可溶性精子膜抗原包被，則本法敏感、特異、客觀、定量，能確定抗體類型，且易操作。BA—ELISA是在常規(guī)ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新一代定量檢測法，其敏感性、特異性超過常規(guī)法。

5.免疫珠試驗(yàn)(1mmunbeadTest，IBT)用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺微球能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面，在相差顯微鏡或電子顯微鏡下可見到免疫珠隨精子運(yùn)行，若結(jié)合一個或多個免疫珠的精子比例≥10%為陽性。此法可確定抗體的部位、類型及結(jié)合精子的比例，能測出活精子表面結(jié)合的抗體。其敏感性、特異性及重復(fù)性較好，操作稍繁瑣，檢測所需樣本少，可用于宮頸粘液、輸卵管液等微量樣本的檢測。

6.放射性標(biāo)記免疫球蛋白或A蛋白法同位素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白或葡萄球苗A蛋白與結(jié)合在精子表面的精子抗體結(jié)合，用x計數(shù)器測定精于表面的放射活性。若以活精子作為抗原，其特異性及敏感性較高，且可確定抗體類型。但由于每次實(shí)驗(yàn)活精子來源不同，其結(jié)果重復(fù)性較差;且設(shè)備昂貴.操作者易受放射性損害，故此法報道較少。

7，間接免疫熒尤試驗(yàn)精于表面結(jié)合于抗原后，能與標(biāo)有熒光素的第二抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察呈現(xiàn)熒光的陽性精子比例。因試驗(yàn)中需要甲醇固定致精于膜損傷，內(nèi)部抗原外露，而抗內(nèi)部抗原的抗體在冗常人中普遍存在，故假陽性太高，無臨床實(shí)用價值。近年來，作液相培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)過程中無需固定，又重新確定了本法的使用價值。

8.精卵相互作用直接檢查法

(1)精子—透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn)：自腹腔鏡檢查中獲得的人卵與精于在一定條件F孵育后，觀察精子能否穿過透明帶進(jìn)入卵細(xì)胞周圍的空間，若精子不能穿過透明帶，考慮有制動抗體存在。此試驗(yàn)亦受其它因素干擾。

(2)精子—去透明帶倉鼠卵穿透試驗(yàn)(SPA)：將優(yōu)化提取的活精子與無帶倉鼠卵混合孵育，在相差顯微鏡下觀察，若卵內(nèi)含腫脹精子頭(帶尾)為已經(jīng)穿透。SPA可用于判定：①有精漿抗體的精子的受精能力;②各種抗體在阻止受孕時的重要性。此試驗(yàn)也可受多種因素影響。

(二)抗精子細(xì)胞免疫的檢測

對細(xì)胞介導(dǎo)的抗精干免疫的研究資料較少，各家結(jié)論不一。動物實(shí)驗(yàn)及人體檢測表明，抗精于細(xì)胞免疫可能是不育的原因之一。檢測細(xì)胞介導(dǎo)抗精于免疫反應(yīng)的試驗(yàn)主要有淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、白細(xì)胞粘附抑制試驗(yàn)、白細(xì)胞或巨噬細(xì)胞移動抑制試驗(yàn)、皮膚試驗(yàn)及外周血白細(xì)胞促凝血活性法等。所采用的抗原不一，有新鮮洗滌精子、凍融精子、半純化精于等。目前，因使用的抗原不統(tǒng)一，檢測方法各異，研究例數(shù)較少，各種方法的特異性尚難評價，其結(jié)果亦難于比較。

二、抗透明帶免疫性不孕癥的檢測

人卵透明帶來源有限，很難獲取，但人透明帶與豬透明帶問有交叉抗原性，因此實(shí)際丁作中均用豬透明帶代替人卵透明帶用下檢測人血清中透明帶抗體。由于部分正常人血清中存在異種凝集素(主要為IgM)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此檢測前需用新鮮豬紅細(xì)胞吸收待測血清。

1、透明帶沉淀反應(yīng)透明帶表面結(jié)合抗體后，在光鏡或暗視野鏡下呈現(xiàn)折光改變。本法多用于鑒定血清，敏感性低，難用于臨床。

2.放射免疫法用放射性標(biāo)記的豬透明帶抗原與待測血清培養(yǎng)后，分離出抗原抗體復(fù)合物，測定其放射活性。本法能定量，特異性及敏感性較好，但由于放射性損害，且報道不多，故本法尚難肯定。

3.間接免疫熒光試驗(yàn)人抗透明帶抗體結(jié)合至豬卵表面后，標(biāo)有熒光素的抗人免疫球蛋白抗體隨之結(jié)合至透明帶表面，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)明顯的卵周熒光。本法的可靠性有賴于其它客觀方法證實(shí)。

4.ELISA及BALISA法以豬透明帶抗原包被固相載體，另加待測血清、酶標(biāo)第二抗體及底物，分步培養(yǎng)洗滌，最后根據(jù)底物顏色變化情況判斷結(jié)果。本法所需樣本量少，無需特殊設(shè)備，操作簡便，能定量測定抗體并確定抗體類型，特異性及敏感性較好。BA—ELISA具有常規(guī)ELISA的優(yōu)點(diǎn)，而其敏感性大為提高。

5.被動血凝法用純化的豬透明帶抗原包被其他物種的紅細(xì)胞為抗原靶標(biāo)，在存在透明帶抗體的情況下，致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。此法研究報道較少，難以評價其敏感性和特異性。

6.精子—透明帶結(jié)合或穿透試驗(yàn)若存在透明帶抗體或抗精子抗體，此法均可陽性。由于試驗(yàn)受培養(yǎng)環(huán)境因素影響較大，故對不同實(shí)驗(yàn)室的研究結(jié)果難以比較。此法可與其它方法配合應(yīng)用，相互補(bǔ)充，以保證結(jié)果的可靠性。